Basel Üniversitesi Biozentrum’dan Prof. Markus Affolter liderliğindeki araştırma grubu, mevcut CRISPR / Cas teknolojilerini daha da geliştiren yeni bir yöntem geliştirdi: etiketlerin gen düzeyinde proteinlere daha kesin ve sorunsuz bir şekilde yerleştirilmesine izin veriyor. Bu teknoloji, canlı organizmalardaki proteinler üzerine yapılan araştırmaları önemli ölçüde geliştirebilir ve tıbbi araştırmalar için yeni olanaklar sunar.
Devrim niteliğindeki CRISPR / Cas teknolojisi ile canlı organizmaların DNA’sı hassas bir şekilde değiştirilebilir.
Belirli bir DNA dizisini tanıyan bir kılavuz RNA kullanılarak, Cas9 proteini bu diziye alınır ve DNA’yı keser.
Bu hedeflenen kesim, DNA’nın bu belirli konumda onarılmasına veya değiştirilmesine izin verir.
Basel Üniversitesi Biozentrum’dan Prof. Markus Affolter’in ekibi, meyve sineğinde (Drosophila melanogaster) TOHUM / Hasat adı verilen yeni bir yöntem geliştirdi. Bu yöntem, CRISPR-Cas9 tekniğini Tek İplikli Tavlama (SSA) onarım yolu ile birleştirerek, genom çapındaki değişikliklerin daha verimli ve istenmeyen yara izleri bırakmadan gerçekleştirilmesini sağlar.
Çalışma Developmental Cell bülteninde yayımlandı.
Two methods combined
TOHUM/Hasat yöntemi iki aşamada ilerler. İlk adımda, araştırmacılar bir protein kodlayan bölge içinde istenen DNA bölgesine bir işaretleyici gen soktular.
Bu işaretleyici hedeflenen konuma yerleştirilir ve başarılı değişiklikleri izole etmek için kullanılır.
İkinci adımda, işaretleyici eksize edilir ve DNA kırılma noktaları, Tek İplikli Tavlama (SSA) onarım yolu ile onarılır.
“Bu, DNA’yı tam işlevini sürdürürken kusursuz bir şekilde kesmemizi sağlıyor,” diye açıklıyor kitabın yazarı Gustavo Aguilar.
“Her iki yöntemin kombinasyonu, genomda istenen herhangi bir proteini ikincil hasar olmadan işaretlemeyi mümkün kılıyor ve bu da proteinlerin canlı organizmalardaki işlevlerini incelememize izin veriyor.”
More precise and efficient
Affolter, “Araştırmamız için genom boyunca DNA’daki değişiklikleri tanıtmak ve analiz etmek istediğimizden, yöntemin hem kesin hem de verimli olması gerekiyor” diye açıklıyor.
“Ve TOHUM / Hasat yöntemi her ikisidir. Başarılı eklemelerin en sağlam taramasını ve sorunsuz etiketlemenin tüm avantajlarını bir araya getiriyor.”
New research opportunities
SEED/Harvest yönteminin avantajlarından biri, proteinlerin belirli doku ve hücre tiplerinde etiketlenebilmesidir.
Hassas genetik: Yeni CRISPR yöntemi, verimli DNA modifikasyonu sağlıyor | Bilim Günlüğü (sciencedaily.com): Hassas genetik: Yeni CRISPR yöntemi, verimli DNA modifikasyonu sağlar.